引物產品使用方法

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Oligo合成產品使用說明

尊敬的客戶：

您好！

感謝您對我們的信任與支持！您在使用本公司的Oligo合成產品時請閱讀以下說明。

（1） 我們提供的合成報告上的Oligo序列是該Oligo合成時，由合成儀控制電腦及時打印的，所合成的oligo序列與此序列完全一致，如果該序列與您提交給我們的序列不同，請您立即與我們聯系。

（2） 我們所提供的Oligo是通過紫外分光光度計在260nm波長下來定量的，其摩爾消光系數是根據堿基組成和鄰位效應計算所得。我們在合成報告單上提供了每條Oligo的分子量、OD數、以及每管OD的nmole和μg數等，其中DNA還提供Tm值、GC含量值等。在引物的標簽上我們同時提供了每管引物的總nmole數。

此報告單上提供的Oligo分子量均按照精確算法進行計算，公布如下：

MWDNA=（#A×313.21）+（#G×329.21）+（#C×289.18）+（#T×304.20）+（#I×314.19）+（#U×290.17）+（Nmod×Wmod）-61.96

MWRNA=（#A×329.21）+（#G×345.21）+（#C×305.18）+（#U×306.20）+（Nmod×Wmod）-61.96

注：#代表對應堿基的個數；Nmod，Wmod分別為修飾基團的數目和分子量；兼并堿基的分子量為兼并堿基的分子量總和除以兼并數。

TM值計算公式：當長度≤20mer，Tm=4℃(G+C)+ 2℃(A+T);當長度>20mer,Tm=0.41(% of GC)-675/L+81.5

注：1、L:引物堿基數：% of GC ：引物GC含量；% of GC = GC個數/引物總堿基數

2、TM值計算并不保證正確，只是為實驗參數設置提供一個參考。

（3） 我們提供的Oligo合成產品經真空干燥呈薄膜狀或粉末狀附在離心管壁上，使用前請先離心再小心開啟，以免丟失。如您需要將引物稀釋到10 uM,需要加入該管引物的（總nmole數*100） μL的無菌水或者pH8.0的TE溶液，然后輕輕蓋上管蓋，震蕩混勻使其充分溶解。為了防止Oligo降解，溶解后請于-20℃保存，并避免反復凍融。尤其需要注意的是，RNA極易被RNase降解，因此必須確保在溶解以及相關實驗操作時在無RNase的環境下進行。凡Oligo使用一段時間后出現講解的，均可能與您的保存方式和實驗用水的質量相關，此類情況我公司不承擔相關責任。

（4）我們提供的Oligo的5’端和3’端均為羥基，可直接用于PCR。如果需要標記磷酸基團，請在提交訂單時在本公司訂購單的5’端和3’端修飾欄的下拉框內選擇Phosphate。如需其他的熒光標記和堿基修飾服務，也請在此下拉框中選擇。

（5）熒光標記的產品，如FAM、HEX、TAMRA等標記的Oligo因為光敏感，需避光保存。

（6）對于DNA引物我們提供PAGE和HPLC純化方式。

（7）引物合成是一種多步驟的化學反應，每一步的合成效率不可能達到100%，副產品不可以避免。在您PCR擴增克隆以后，建議挑取2-3個克隆進行測序。如您發現所有克隆都在引物區存在突變，請及時與我們聯系，我們會為您免費重新合成一次。